達(dá)立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥的藥效學(xué)及作用機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2024-07-13 08:13:23 | 來(lái)源：【藥物研發(fā)團(tuán)隊(duì) 2024-7-13】
中醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為，氣升降出入運(yùn)行于全身，是人體生命活動(dòng)的根本。當(dāng)人體某一臟腑或經(jīng)絡(luò)發(fā)生病變，則影響氣的疏通，出現(xiàn)氣滯或氣逆。氣滯的臨床表現(xiàn)特點(diǎn)為脹、悶、痛，而氣逆則表現(xiàn)為嘔吐、惡心或喘息。隨氣機(jī)阻滯部位不同，可表現(xiàn)為不同的臨床癥狀，如脾胃氣滯可致脘腹脹滿疼痛、噯氣泛酸、惡心嘔吐、便秘或腹瀉，肝郁氣滯可致情志異常。正常的情志活動(dòng)不僅屬于心主神明的生理學(xué)范疇，還與人體氣血的正常運(yùn)行有著密切的關(guān)系，特別是肝氣的疏泄是調(diào)理情志的主要機(jī)制。肝的疏泄功能正常，則氣血調(diào)達(dá)，情志調(diào)和；否則，就會(huì)出現(xiàn)肝氣郁滯，情志憂郁，神疲倦怠，失眠，納差等與消化不良和抑郁癥相關(guān)的臨床表現(xiàn)，即痞滿證郁證中醫(yī)證候。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的角度來(lái)看，氣滯或氣逆與消化系統(tǒng)疾病如消化不良和抑郁癥有關(guān)，其病因主要是內(nèi)臟平滑肌的運(yùn)動(dòng)功能紊亂，或表現(xiàn)為亢進(jìn)如嘔吐、疼痛、腹瀉等，或表現(xiàn)為抑制如脹氣、便秘等。因此，疏肝解郁、和胃降逆、通利消滯可以在緩解功能性消化不良癥狀的同時(shí)，改善神經(jīng)精神活動(dòng)，特別是可以改善互為因果關(guān)系的功能性消化不良伴抑郁癥患者的神經(jīng)精神癥狀，即改善痞滿證郁證中醫(yī)證候。
達(dá)立通顆粒是由柴胡、枳實(shí)、木香、陳皮、清半夏、蒲公英、焦山楂、焦檳榔、雞矢藤、黨參、延胡索、六神曲（炒）十二味中藥材經(jīng)蒸餾法提取揮發(fā)油、倍他環(huán)糊精包合揮油、水提法提取活性成分、醇沉法除雜后得到的水溶性稠膏與糊精、甜菊素制成的無(wú)蔗糖型顆粒劑，具有清熱解郁、和胃降逆、通利消滯作用，用于肝胃郁熱所致痞滿證。癥見(jiàn)胃脘脹滿、噯氣、納差、胃中灼熱、嘈雜泛酸、脘腹疼痛、口干口苦；運(yùn)動(dòng)障礙型功能性消化不良見(jiàn)上述癥狀者。
為了探索達(dá)立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥的作用機(jī)制、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)以及藥效化學(xué)標(biāo)志物和生物標(biāo)志物，南昌弘益藥業(yè)有限公司于2021年5月與王廣基院士團(tuán)隊(duì)合作開(kāi)展相關(guān)研究，已經(jīng)取得了一系列研究成果，并以學(xué)術(shù)論文和研究進(jìn)展報(bào)告的形式陸續(xù)發(fā)表。前期研究結(jié)果顯示，達(dá)立通顆粒能顯著促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)和胃排空，其治療功能性消化不良的主要藥效活性成分是黃酮類、生物堿類、有機(jī)酸類、萜類化合物；口服達(dá)立通顆粒，其主要藥效活性成分能被機(jī)體快速吸收，在組織器官中廣泛分布，其中，絕大部分藥效活性成分在胃和腸靶器官分布，有少量藥效活性成分在腦組織中分布；達(dá)立通顆粒能調(diào)節(jié)腸道免疫系統(tǒng)，具有抗炎、抗氧化作用，能修復(fù)功能性消化不良模型動(dòng)物受損的十二指腸絨毛，對(duì)功能性消化不良模型動(dòng)物胃、腸神經(jīng)遞質(zhì)釋放具有調(diào)節(jié)作用，能顯著改善慢性社交挫敗應(yīng)激抑郁模型動(dòng)物的抑郁癥狀。下一階段，王廣基院士團(tuán)隊(duì)將進(jìn)一步深入探索達(dá)立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥（抑郁癥伴功能性消化不良）的作用機(jī)制，開(kāi)展腸道結(jié)構(gòu)和功能、腸道菌群、腸道宏基因研究以及郁證研究，包括達(dá)立通顆粒對(duì)功能性消化不良模型動(dòng)物十二指腸屏障的修復(fù)作用、腸道菌群對(duì)達(dá)立通顆粒體內(nèi)代謝的影響、達(dá)立通顆粒對(duì)功能性消化不良模型動(dòng)物腸道菌群及內(nèi)源性小分子和神經(jīng)遞質(zhì)的影響、功能性消化不良模型動(dòng)物腸道菌群宏基因組學(xué)特征、達(dá)立通顆粒對(duì)糖水偏好相關(guān)的抑郁模型動(dòng)物的藥效學(xué)及其作用機(jī)制研究等。為建立以藥效化學(xué)標(biāo)志物和藥效生物標(biāo)志物為核心的達(dá)立通顆粒整體質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)體系以及達(dá)立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥臨床試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)提供科學(xué)依據(jù)。
快感缺失、興趣缺失、情緒低落是抑郁癥的核心癥狀。 嚙齒類動(dòng)物對(duì)甜食具有天生的偏好，這種偏好與其體內(nèi)分泌的多巴胺等興奮性神經(jīng)遞質(zhì)及5-羥色胺等抑制性神經(jīng)遞質(zhì)和愉悅的精神情志密切相關(guān)。通過(guò)對(duì)嚙齒類動(dòng)物糖水偏好的天性和精神情志進(jìn)行干擾，可導(dǎo)致其體內(nèi)多巴胺等興奮性神經(jīng)遞質(zhì)分泌明顯減少、5-羥色胺等抑制性神經(jīng)遞質(zhì)分泌明顯增多等異常，表現(xiàn)為精神情志低落、萎糜不振等抑郁癥狀和胃脘脹滿、食欲不振、早飽、胃中灼熱、泛酸嘈雜、脘腹疼痛等功能性消化不良癥狀。通過(guò)糖水偏好實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)給藥模型動(dòng)物糖水偏好恢復(fù)情況和神經(jīng)遞質(zhì)釋放回調(diào)等情況以及抑郁癥和功能性消化不良癥狀改善情況，評(píng)價(jià)達(dá)立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥的療效和作用機(jī)制。因此，糖水偏好實(shí)驗(yàn)是研究達(dá)立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥藥效學(xué)和作用機(jī)制的理想方法。本文專門介紹糖水偏好實(shí)驗(yàn)的原理、實(shí)驗(yàn)方法、評(píng)價(jià)指標(biāo)等，以期對(duì)達(dá)立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥的藥效學(xué)和作用機(jī)制有一個(gè)比較全面的理解。
一、糖水偏好實(shí)驗(yàn)原理
快感缺失、興趣缺失、情緒低落是抑郁癥的核心癥狀。糖水偏好實(shí)驗(yàn)（Sucrose Preference Test，SPT）的原理是基于嚙齒類動(dòng)物對(duì)甜食的天生偏好。在實(shí)驗(yàn)中，動(dòng)物被提供兩個(gè)飲水裝置，一個(gè)裝有蔗糖溶液，另一個(gè)裝有飲用水，動(dòng)物可以自由選擇。正常情況下，健康且心理狀態(tài)良好的動(dòng)物會(huì)表現(xiàn)出對(duì)甜味（如蔗糖溶液）的顯著偏好。這種偏好反映了動(dòng)物的獎(jiǎng)勵(lì)系統(tǒng)功能，主要是腦中的多巴胺途徑。多巴胺是一種與愉悅感、獎(jiǎng)勵(lì)和動(dòng)機(jī)密切相關(guān)的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)。當(dāng)動(dòng)物處于抑郁狀態(tài)時(shí)，它們的獎(jiǎng)勵(lì)系統(tǒng)可能受損，表現(xiàn)為對(duì)甜味的偏好降低。因此，通過(guò)比較動(dòng)物對(duì)糖水與飲用水的選擇，可以間接評(píng)估它們的情緒狀態(tài)和抑郁程度。研究顯示，1%～2%的蔗糖溶液濃度是區(qū)分小鼠或大鼠是否有快感缺失和抑郁的理想選擇。
糖水偏好實(shí)驗(yàn)是一種廣泛用于評(píng)估嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物情緒狀況的行為測(cè)試。它主要用于檢測(cè)動(dòng)物的快樂(lè)水平和抑郁癥狀。這種測(cè)試基于一個(gè)觀察到的現(xiàn)象：健康的動(dòng)物通常更喜歡甜味的食物和飲料，而憂郁或抑郁的動(dòng)物可能對(duì)甜味物質(zhì)的喜好程度降低。通過(guò)檢測(cè)動(dòng)物對(duì)蔗糖溶液的偏好程度，可以作為評(píng)估動(dòng)物快感缺失癥狀和抑郁程度和檢測(cè)抗抑郁藥物改善行為學(xué)的有效方法，通過(guò)觀察藥物治療后動(dòng)物糖水偏好是否恢復(fù)，來(lái)評(píng)估抗抑郁藥物的療效。
二、糖水偏好實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介
糖水偏好實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)抑郁癥中快感缺失癥狀的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)，1982年由模型建立者Willner首次采用，目前，該實(shí)驗(yàn)是抗抑郁藥物藥效學(xué)研究最主要的行為學(xué)檢測(cè)方法之一。
糖水偏好實(shí)驗(yàn)是利用嚙齒類動(dòng)物對(duì)甜味的偏好而設(shè)計(jì)一種檢測(cè)方法。動(dòng)物禁食一段時(shí)間后，同時(shí)給予飲用水和低濃度蔗糖水，以動(dòng)物對(duì)蔗糖水的偏嗜度（蔗糖偏嗜度）為指標(biāo)檢測(cè)動(dòng)物是否出現(xiàn)快感缺失這一抑郁癥狀。
正常情況下，動(dòng)物傾向于選擇甜味的蔗糖溶液。但在慢性應(yīng)激導(dǎo)致的抑郁模型中，動(dòng)物對(duì)蔗糖溶液的偏好會(huì)減少。通過(guò)檢測(cè)動(dòng)物對(duì)蔗糖溶液的偏好程度，可以作為評(píng)估動(dòng)物快感缺失癥狀和抑郁程度的有效方法。研究顯示，1%～2%的蔗糖溶液濃度是區(qū)分小鼠或大鼠是否有快感缺失和抑郁的理想選擇。
三、糖水偏好實(shí)驗(yàn)設(shè)備
糖水偏好實(shí)驗(yàn)設(shè)備主要有飼養(yǎng)籠、不銹鋼柵欄底板、飲水瓶、接觸探測(cè)電路、控制器、糖水偏好實(shí)驗(yàn)軟件等。
糖水偏好實(shí)驗(yàn)設(shè)備是基于電流檢測(cè)的原理，通過(guò)檢測(cè)動(dòng)物舔飲水瓶頭金屬嘴和動(dòng)物站的金屬板之間形成電流回路（檢測(cè)電流小于2μA）來(lái)計(jì)算動(dòng)物的舔水次數(shù)，從而評(píng)價(jià)動(dòng)物的糖水偏好。
四、糖水偏好實(shí)驗(yàn)流程
糖水偏好實(shí)驗(yàn)包括動(dòng)物適應(yīng)期、動(dòng)物基線檢測(cè)、測(cè)試和數(shù)據(jù)分析四個(gè)階段，完成一套實(shí)驗(yàn)的時(shí)間約8天。
（一）適應(yīng)期
1、適應(yīng)階段（第1天至第4天）
在這一階段，將裝有1%蔗糖溶液和飲用水的兩個(gè)飲水瓶分別放置在動(dòng)物飼養(yǎng)籠或?qū)嶒?yàn)測(cè)試箱的對(duì)應(yīng)位置。為避免動(dòng)物形成位置偏好，應(yīng)每天更換瓶子的位置。
2、蔗糖溶液適應(yīng)
從第1天的下午5點(diǎn)開(kāi)始，連續(xù)48小時(shí)在動(dòng)物飼養(yǎng)籠中放置兩個(gè)飲水瓶，一個(gè)裝有1%蔗糖溶液，另一個(gè)裝有飲用水，直至第3天的下午5點(diǎn)。
3、實(shí)驗(yàn)設(shè)備準(zhǔn)備
在第3天，使用75%乙醇或無(wú)味消毒水清潔動(dòng)物飼養(yǎng)籠或?qū)嶒?yàn)測(cè)試箱，并晾干。在每個(gè)籠或箱體的兩個(gè)飲水瓶中分別灌裝新鮮的1%蔗糖溶液和飲用水，并在食槽中放置適量食物。每天更換兩個(gè)瓶子的位置，以避免動(dòng)物形成位置偏好。
4、實(shí)驗(yàn)設(shè)備適應(yīng)
在第3天的下午5點(diǎn)，將適應(yīng)好蔗糖溶液的動(dòng)物從飼養(yǎng)籠轉(zhuǎn)移到準(zhǔn)備好的實(shí)驗(yàn)測(cè)試箱中。此時(shí)，動(dòng)物可以自由接觸兩種不同的溶液（1%蔗糖溶液和飲用水）及食物。這一步驟持續(xù)一天，至第4天的下午5點(diǎn)，之后將動(dòng)物放回原飼養(yǎng)籠，提供飲用水和食物。
（二）基線檢測(cè)測(cè)
1、實(shí)驗(yàn)測(cè)試箱準(zhǔn)備
提前準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)測(cè)試箱，分別在兩個(gè)飲水瓶中灌裝新鮮的1%蔗糖溶液和飲用水，并在食槽中放置適量食物。
2、第一次測(cè)試
在第4天晚上9:00，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從飼養(yǎng)籠轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)測(cè)試箱中，記錄從當(dāng)晚9:00到第5天早上9:00，共12小時(shí)內(nèi)動(dòng)物對(duì)裝有兩種溶液的飲水瓶頭金屬嘴的舔舐次數(shù)。測(cè)試結(jié)束后，將動(dòng)物放回飼養(yǎng)籠，并提供飲用水和食物，觀察記錄動(dòng)物的外觀、行為、精神狀態(tài)、飲食、飲水、分泌物、排泄物、體重等情況。
3、清潔測(cè)試實(shí)驗(yàn)箱
清潔實(shí)驗(yàn)測(cè)試箱體，以備后續(xù)使用。
4、第二次測(cè)試
在第5天晚上9:00，再次將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從飼養(yǎng)籠轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)測(cè)試箱中（注意更換兩個(gè)飲水瓶放置的位置以避免位置偏好），并記錄從當(dāng)晚9:00到第6天早上9:00，共12小時(shí)內(nèi)動(dòng)物對(duì)裝有兩種溶液的飲水瓶頭金屬嘴的舔舐次數(shù)。測(cè)試結(jié)束后，將動(dòng)物放回飼養(yǎng)籠，并提供飲用水和食物，觀察記錄動(dòng)物的外觀、行為、精神狀態(tài)、飲食、飲水、分泌物、排泄物、體重等情況。
5、剖檢
取部分動(dòng)物剖檢，檢測(cè)其十二指腸結(jié)構(gòu)和功能以及神經(jīng)遞質(zhì)水平。
6、數(shù)據(jù)記錄
記錄兩輪基線測(cè)試的數(shù)據(jù)、十二指腸結(jié)構(gòu)和功能以及神經(jīng)遞質(zhì)水平，用于后續(xù)的對(duì)比和分析。
（三）測(cè)試
1、饑餓處理
測(cè)試前一天，即第6天晚上9點(diǎn)至第7天晚上9點(diǎn)，從動(dòng)物飼養(yǎng)籠中移除所有食物和水瓶，進(jìn)行饑餓處理。
2、實(shí)驗(yàn)測(cè)試箱準(zhǔn)備
提前準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)測(cè)試箱，分別在兩個(gè)飲水瓶中灌裝新鮮的1%蔗糖溶液和飲用水，并在食槽中放置適量食物。
3、測(cè)試
在第7天晚上9:00，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放入實(shí)驗(yàn)測(cè)試箱中，記錄至第8天早上9:00，共12小時(shí)內(nèi)動(dòng)物對(duì)裝有兩種溶液的飲水瓶頭金屬嘴的舔舐次數(shù)，觀察記錄動(dòng)物的外觀、行為、精神狀態(tài)、飲食、飲水、分泌物、排泄物、體重等情況，并對(duì)動(dòng)物進(jìn)行剖檢，檢查十二指腸結(jié)構(gòu)和功能以及神經(jīng)遞質(zhì)水平。
（四）數(shù)據(jù)分析
1、快感缺失定義
在糖水偏好測(cè)試中，動(dòng)物對(duì)蔗糖偏好的降低被視為快感缺失。使用測(cè)試箱體測(cè)量的是動(dòng)物對(duì)兩種溶液的舔舐次數(shù)，由于舔舐次數(shù)與溶液攝入量成正相關(guān)，因此可以通過(guò)比較舔舐次數(shù)來(lái)評(píng)估蔗糖偏好。
2、蔗糖偏好評(píng)估
如果蔗糖溶液的舔舐次數(shù)多于飲用水，表示有蔗糖偏好；如果蔗糖溶液的舔舐次數(shù)減少，表示蔗糖偏好降低，可能是快感缺失的跡象，這是抑郁狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)。
3、糖偏好替代測(cè)量方法
在沒(méi)有舔舐次數(shù)計(jì)數(shù)裝置的情況下，可以通過(guò)測(cè)量飲水瓶?jī)?nèi)溶液的體積或質(zhì)量來(lái)計(jì)算蔗糖偏好比。蔗糖偏好比＝（蔗糖攝入量/總攝入量）×100%，其中總攝入量是蔗糖溶液和飲用水?dāng)z入量的總和。
4、外觀行為觀察
動(dòng)物的外觀、行為、精神狀態(tài)、飲食、飲水、分泌物、排泄物、體重等變化，可以用于判斷抑郁癥、功能性消化不良癥狀改善情況。
5、十二指腸結(jié)構(gòu)和功能檢查
動(dòng)物的十二指腸結(jié)構(gòu)和功能變化，可以用于分析藥物的作用機(jī)制。
6、神經(jīng)遞質(zhì)水平檢測(cè)
動(dòng)物的神經(jīng)遞質(zhì)釋放水平變化，可以用于分析藥物的作用機(jī)制。
四、糖水偏好實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
晝夜節(jié)律會(huì)影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飲水行為，因此在糖水偏好實(shí)驗(yàn)中選擇固定的糖水偏好測(cè)試時(shí)間非常重要。為確保一致性，所有基線測(cè)試和最終測(cè)試均應(yīng)在夜間進(jìn)行。
為減少其他變量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，應(yīng)使用蔗糖偏好比而不是絕對(duì)攝入量來(lái)作為糖水偏好評(píng)估的主要指示參數(shù)。
為避免飲水瓶泄漏等可能的實(shí)驗(yàn)誤差，應(yīng)使用特制的舔舐行為測(cè)試箱。由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物每次的飲水量較小，可能難以在特定測(cè)試時(shí)間內(nèi)觀察到絕對(duì)攝入量的顯著差異，此時(shí)統(tǒng)計(jì)舔舐次數(shù)可能會(huì)提供更明顯的數(shù)據(jù)差異。
為防止實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲水量異常，必須嚴(yán)格控制蔗糖溶液的濃度和測(cè)試時(shí)長(zhǎng)等關(guān)鍵因素，確保實(shí)驗(yàn)條件的一致性和準(zhǔn)確性。
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